Mikrobiyal hyaluronik asit üretimi ve saflaştırılması
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Ankara Üniversitesi, Biyoteknoloji Enstitüsü, Biyoteknoloji Anabilim Dalı, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2015
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: DİDEM MİMİROĞLU
Danışman: NURAY YAZIHAN
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Hyaluronik asit (HA) yüksek molekül ağırlıklı bir glikozaminoglikan polimeridir, molekül ağırlığı onun fizyolojik rolünü, reolojik özelliklerini ve bunlara bağlı olarak uygulama alanlarını belirlemektedir. HA, rutin olarak hem Grup A hem de Grup C Streptococcus türlerinin fermantasyonu ile üretilmektedir. Günümüz biyoteknoloji alanı içerisinde hyaluronik asit oldukça önemli bir yere sahiptir. HA' nın farklı formulasyonları ve moleküler ağırlıkları; oftalmoloji, ortopedik cerrahiler, rejenerasyon sürecinin hızlandırılması ve desteklenmesi gibi alanlar başta olmak üzere tıpta ve günümüzde oldukça yüksek bir pazar payına sahip olan kozmetik sektöründe yaygın bir şekilde kullanılmaktadır. Bu tez çalışması kapsamında, Streptococcus equi (S.equi) (9682) mikroorganizması kullanılarak HA üretimi, saflaştırılması, immünojenite ve toksikolojik analizlerin yapılması amaçlanmıştır. Mikrobiyal üretimde optimum koşulların belirlenebilmesi amacıyla, farklı çalkalama hızları, pH değerleri, inkübasyon sıcaklıkları, inokulum ve sukroz konsantrasyonları denenmiştir. Ardından kültür sıvısından ekstraksiyon yöntemi ile HA elde edilmiştir. Elde edilen HA çözeltisine farklı moleküler boyutlardaki diyaliz membranları uygulanarak, saflaştırma işlemi gerçekleştirilmiştir. Elde edilen ve ticari olarak satılan farklı moleküler ağırlıklardaki HA' nın fare deri fibroblast (L929, ATCC) hücre dizisi kullanılarak in vitro hücre canlılık değerlendirmesi (MTT testi) yapılmış ve biyouyumluluk değerlendirmesi için insan monositik hücre dizisi (THP-1, ATCC) makrofaja, phorbol-12-miristat-13-asetat (PMA) uygulaması ile farklılaştırılarak elde edilen HA makrofaj hücrelerine uygulanmış ve immünolojik yanıt oluşturup oluşturmadığı proinflamatuar sitokinlerden tümör nekroze edici faktör (TNF-α), interlökin-8 (IL-8) ve anti-inflamatuar sitokin interlökin-10 (IL-10) sekresyon düzeyleri belirlenerek değerlendirilmiştir. Çalışma kapsamında, üretilen HA' nın, ticari olarak alınan HA ile aynı immünolojik yanıtı vermiş olduğu gözlenmiştir.