Alternaria türlerindeki genetik varyasyonların tespit edilmesinde RAPD-PCR tekniğinin kullanımı


Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Ankara Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2019

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: SERKAN KIZILIRMAK

Danışman: FATMA SARA DOLAR

Özet:

Alternaria cinsi, dünyada çok sayıda bitki türünde hastalığa neden olan önemli bir bitki patojenidir. Morfolojik özellikleri esas alınarak yapılan tür ayırımı oldukça karmaĢık olup klasik teĢhis yöntemleri her zaman baĢarılı sonuçlar vermemektedir. Son yıllarda diğer bitki patojenlerinde olduğu gibi bu cinsin türlerinin ayrımında da moleküler yöntemlerin kullanımı giderek artmıĢtır. Ülkemiz, önemli bir fındık ve havuç üreticisi konumunda olup bu her iki konukçuda Alternaria türlerinin neden olduğu hastalıklar önemli düzeyde zarara yol açmaktadır. Bu nedenle özellikle bu konukçulardan izole edilen Alternaria türlerinin teĢhisinde RAPD-PCR (Random Amplified Polymophic DNAPolymerase Chain Reaction) tekniğinin kullanılabilirliğinin araĢtırılması bu çalıĢma kapsamında amaçlanmıĢtır. Fındık ve Havuç baĢta olmak üzere farklı konukçulardan elde edilmiĢ doksan iki Alternaria izolatının kültür ve konidi morfolojisi detaylı olarak incelenmiĢtir. Bu izolatlardan Alternaria alternata, A. tenuissima, A. radicina, A. carotiincultae, A. brassicicola’nın teĢhisleri yapılmıĢtır. Bununla birlikte bu izolatlar arasından seçilmiĢ olan otuz altı izolat ile otuz iki farklı primer RAPD-PCR analizi ile değerlendirilmiĢ ve OPI-9, OPR-2, OPA-4, OPA-9, OPF-10 ve OPR-16 primerlerinin en iyi polimorfizmi sağladığı tespit edilmiĢtir. UPGMA algoritması kullanılarak oluĢturulan dendogramda alternata tür grubu, tenuissima tür grubu, radicina tür grubu, brassicicola tür grubunun oluĢtuğu gözlemlenmiĢtir The genus Alternaria is an important plant pathogen that causes disease in many plant species around the world. Species classification based on morphological characteristics is very complex and classical diagnostic methods do not always give precise results. In recent years, as in other plant pathogens, the use of molecular methods to differentiate species of this genus has gradually increased. Our country is an important hazelnut and carrot producer and the diseases caused by Alternaria species cause significant damage in both hosts. Therefore, The aim of this study was to investigate the usefulness of RAPD-PCR (Random Amplified Polymophic DNA - Polymerase Chain Reaction) technique in the identification of Alternaria species isolated from these hosts. The culture and conidia morphology of ninety-two Alternaria isolates obtained from different hosts, especially hazelnut and carrot, were examined in detail. Alternaria alternata, A. tenuissima, A. radicina, A. carotiincultae and A. brassicicola were identified from these isolates. However, thirty-six isolates selected from these isolates were evaluated by thirty two different primers primary with RAPD-PCR analyze and then OPI-9, OPR-2, OPA-4, OPA-9, OPF-10 and OPR-16 primers were found to provide the best polymorphism. It was observed that alternata species group, tenuissima species group, radicina species group, brassicicola species group were seperately clustered in the dendogram created using UPGMA algorithm.