Beta-arrestin-2 proteininin P2X7 reseptörü ile etkileşimi
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Ankara Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, BİYOFİZİK ANABİLİM DALI, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2013
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: SEDA UYSAL
Danışman: MEHMET UĞUR
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:ß-arrestinlerin, G-proteini kenetli reseptörlerin (GPKR) sinyal iletiminin sonlandırılmasında görev aldığı bilinmektedir. Ayrıca ß-arrestinlerin GPKR?leri ile oluşan sinyal iletiminde G-proteinleri aracılığıyla olana paralel, yeni bir sinyal iletim yolağı oluşturdukları da düşünülmektedir. Pürinerjik P2X7 reseptörleri ise ligand bağımlı iyon kanalları olarak GPKRlerinden tamamen ayrı, başka bir reseptör ailesine mensupturlar. P2X7 reseptörü ile ß-arrestinler bir iletişim olduğuna dair literatürde bilgi yok denecek kadar azdır ve ikna edici, net bir çalışma bulunmamaktadır (Feng ve ark., 2005). Bu bilinenlerden farklı olarak, bu çalışmada HEK-P2X7-ßarr-2-GFP hücrelerinde, konfokal mikroskopi yöntemi kullanılarak, ßarr-2 proteininin ATP uyarısı ile (uyarıdan10-15 dk sonra) çekirdeğe toplandığı, bu toplaşmanın çekirdek içerisinde homojen olmayıp çekirdeğin bir alt bölgesinde (çekirdekçik olabileceği düşünülen) lokalize olduğu gösterilmiştir Yapılan kontrol deneyleri ile de desteklenen bu bulgular, HEK hücrelerinde gözlemlediğimiz ATP uygulaması ile oluşan ßarr-2-GFP yer değiştirmesinin P2X7 reseptörü aracılığı ile oluştuğunu düşündürmektedir. Konfokal mikroskopta, HEK-P2X7 hücrelerinde oluşan yanıtın, P2X7Rlerinde ATP ye göre daha etkin olduğu bilinen BzATP agonistine (örnek olarak; Suprenant ve ark.,1996; North, 2002) daha duyarlı olduğu gösterilmiştir. Aynı şekilde P2X7R için iyi agonist olmayan ancak P2YR?ler için agonist olduğu bilinen UTP ve ADP (Jacobson ve Boeynaems, 2010) ile yapılan deneylerde, ölçülebilir bir yanıt oluşmadığı, böylece oluşan yanıtın P2YR?lerine ait bir yanıt olmadığına dair bir bulgu elde edilmiştir. Ayrıca ATP uygulaması NaCl deney çözeltisinde yapıldığında oluşan ßarr-2-GFP proteininin çekirdeğe translokasyon yanıtı, KCl deney çözeltisinde oluşan yanıt ile karşılaştırıldığında yanıt oluşan hücre oranının daha az olduğu görülmüştür. Bu çalışmada yapılan tüm deneyler, ATP uygulaması ile gözlenen ßarr-2-GFP yer değiştirme yanıtını oluşturan reseptörün, P2X7R olduğuna işaret etmektedir. ßarr-2nin NES pompası tarafından sürekli aktif olarak hücre çekirdeği dışına taşındığı bilinmektedir, dolayısı ile çekirdek içindeki derişimi sitoplazmaya göre belirgin olarak daha azdır. Literatürde LMB kullanılan çalışmalarda, ßarr-2-GFP proteininin, NES inhibisyonu sonrasında çekirdek içinde homojen bir dağılım gösterdiği bildirilmektedir (Wang ve ark., 2003). Bu çalışmada literatürde bilinenlerden tamamen farklı olarak, NES inhibitörü LMB (20 ng/ml) ile hücrelerin 20 saat inkübe edilmesi sonrası HEK-293-ßarr-2-GFP ve HEK-P2X7-ßarr-2-GFP hücrelerinin önemli bir kısmında ßarr-2-GFP proteininin çekirdek içinde, çekirdekçik benzeri bir yapıda toplaştığı gözlendi. Bu bulgu ßarr-2 proteinin çekirdekçikte yüksek afiniteli bir bağlanma bölgesine sahip olduğunu ve bu bölgeye bağlanmasının NES ve bazı reseptörler tarafından regüle edilebildiğini düşündürmektedir.