Akademik Veri Yönetim Sistemi
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Ankara Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2008
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: EKİN ÖZGE SÜZGÜN
Danışman: MEHMET UĞUR
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Lanthanum iyonunun (La3+) Ca2+ sinyal mekanizmasında en iyi bilinen özelliği, spesifik olmayan Ca2+ kanalı blokörü olmasıdır. La3+'un gözlenen diğer bir etkisi ise, GPCR'ler ve IP3 üzerinden oluşan Ca2+ sinyalini de inhibe etmesidir. Bu çalışmada, La3+'un bu inhibisyonununun sinyal iletim yolağının hangi aşamasında olduğu, farklı reseptör ve hücre tiplerinde incelenmiştir. Deneylerde [Ca2+]i değişikliği, fluo-3 Ca2+ indikatörü kullanıarak takip edilmiştir. La3+'un Ca2+ yanıtlarına etkisi, hücrelere La3+'lu banyo solüsyonunda agonist uygulaması sonucu gözlenmiştir. IP3 ölçümü yapabilmek için, hücreler GFP-PHPLCdelta1C ile transfekte edilmişlerdir. Tüm deneylerde, LEICA SP5 konfokal mikroskop kullanılmıştır. Deneyler, nominal olarak Ca2+'suz banyo solüsyonunda yapılmıştır.Alfa1b-adrenerjik reseptörünün kalıcı transfeksiyonla eksprese ettirildiği RAT-1alfa1b hücrelerinde, La3+'un PE yanıtlarını inhibe ettiği, bu inhibisyonun agonist konsantrasyonu artırıldığında bile sürdüğü gözlenmiştir. HEK-293 hücrelerinde, hücrede endojen olarak eksprese edilen M3 muskarnik reseptörü aracılı oluşan ACh etkili Ca2+ yanıtında La3+'un inhibitör bir etkisi görülmemiştir. Kalıcı olarak M3 reseptörü transfekte edilmiş LTK-8 hücrelerinde de, La3+'un Ca2+ sinyali üzerinde bir inhibisyon yapmadığı, IP3 üretimine de bir etkisi olmadığı görülmüştür. La3+'un alfa1b-adrenerjik reseptör yanıtlarını bloke ettiği RAT-1alfa1b hücrelerine yapılan kalıcı M3 transfeksiyonu sonucunda da La3+, ACh etkili Ca2+ yanıtını inhibe etmemiştir.Bu deneylerden yapılan en basit çıkarım, La3+'un, GPCR aracılı Ca2+ yanıtını, reseptör tipi ile ilişkili bir şekilde etkilediğidir. AbstractThe most recognised effect of lanthanum ions (La3+) on Ca2+ signaling mechanism is that La3+ is a nonspecific Ca2+ channel blocker. The inhibition of La3+ on Ca2+ signal via GPCRs and IP3 is another observed effect of La3+. In this study, at which level in the signaling pathway La3+ exerts this inhibitory effect is investigated. Throughout the experiments, the changes in [Ca2+]i is determined with fluo-3 Ca2+ indicator. The effect of La3+ on Ca2+ signaling is observed by incubating the cells in La3+ containing bath solution prior to agonist application. In order to measure IP3, cells are transfected with GFP-PHPLCdelta1C. In all experiments, LEICA SP5 laser scanning confocal microscope is used. All the experiments are performed in Ca2+ free solution.In RAT-1alpha1b cells, where alphaadrenerjik receptor is stably exspressed, La3+ inhibits PE induced Ca2+ response via alpha1b-adrenergic receptors, and this inhibition endures even when the agonist concentration is increased. In HEK-293 cells where M3 muscarinic receptor is endogenously exspressed, La3+ did not have any inhibitory effect on ACh induced Ca2+ signal via M3 receptors. In LTK-8 cells, where M3 receptor is stably exspressed, La3+ also did not exert any inhibition, and the IP3 levels are not affected by La3+. Similar results were obtained in RAT-1alpha1b cells, where La3+ also failed to inhibit ACh induced Ca2+ signal, after M3 receptor is stably expressed to these cells.The outcome of these experiments is that La3+ do not inhibit Ca2+ signal via M3 receptor, regardless of the cell type. The inhibitory effect of La3+ on Ca2+ signal is related with the receptor type.