Enterococcus faecalis suşlarında protein profilinin antijenik glikoproteinler yönünden değerlendirilmesi


Tezin Türü: Doktora

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Ankara Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2006

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: GÜLAY ÇİFTCİ

Danışman: HAMDİ UYSAL

Özet:

Enterococcus faecalis Suşlarında Protein Profilinin Antijenik Glikoproteinler Yönünden Değerlendirilmesi GÜLAY ÇİFTCİ Bu araştırmada Agregasyon Maddesi (AS), jelatinaz ve sitolizin varlığı yönünden çeşitlilik gösteren Enterococcus faecalis suşlarının antijenik yapısının belirlenmesi, karşılaştırmalı olarak analiz edilmesi ve bu suşlarda glikoprotein varlığının araştırılması amaçlandı. Enterococcus faecalis suşlarının protein profillerinin belirlenmesi için yapılan Sodyum Dodesil Poliakrilamid Jel Elektroforez'i sonucunda çalışmada kullanılan her üç suşta da 165-29 kDa arasında protein bantları saptandı. E.faecalis OG1RF ve Enterococcus faecalis OG1X (pAM9058) suşlarında 44 ve 83 kDa ağırlığındaki protein bantlarının belirgin bant olduğu, Enterococcus faecalis OG1X (pAM944)'te ise 43 kDa ağırlığındaki bantın belirgin bant olduğu gözlendi. Enterokok suşlarının antijenik olarak karakterizasyonu amacıyla suşlara immunblot analizi uygulandı. Her üç suşta da 165, 35 ve 32 kDa'luk bantların ortak olduğu saptandı. Enterococcus faecalis OG1X (pAM944) suşuna karşı 85, 65, 55, 39 ve 29 kDa'luk bantlar, Enterococcus faecalis OG1RF suşuna karşı 83, 75 ve 45 kDa'luk bantlar ve Enterococcus faecalis OG1X (pAM9058) suşuna karşı ise 111, 98, 83, 75, 55, 45 ve 29 kDa'luk bantların antijenik karakterde olduğu görüldü. Çalışmamızda, glikoprotein varlığının araştırılması amacıyla Glikan Tayin Kiti ve PAS boyama yöntemleri kullanıldı. PAS boyama ile her üç etkende de glikoprotein belirlenemedi. Glikan tayin kiti ile Enterococcus faecalis OG1X (pAM944)'te 111, 106 ve 39 kDa Enterococcus faecalis OG1RF ve Enterococcus faecalis OG1X (pAM9058)'te ise 111 ve 39 kDa'luk ağırlığındaki bantların glikoprotein olduğu görüldü. Sonuç olarak bu çalışma ile sitolizin, AS ve jelatinaz yönünden farklılık gösteren Enterococcus faecalis suşlarının tüm hücre protein profilleri arasında farklılık olmadığı, fakat bantların antijenitesinin değişiklik gösterdiği belirlendi. Ayrıca Enterococcus faecalis suşlarında glikoprotein varlığı ilk defa bu çalışma ile ortaya kondu.Abstract Evaluation of Protein Profiles of Enterococcus faecalis Strains in Relation to Antigenic Glycoproteins GÜLAY ÇİFTCİ The aim of this research is the determination of the specific antigenic glycoproteins and comperative analysis of antigenic protein profiles of Enterococcus faecalis strains distinguished with aggregation substance(AS), gelatinase and cytolysine. For the determination of the whole cell protein profiles of Enterococcus faecalis, the Sodium Dodecyl Polyacrylamide Gel Analysis(SDS-PAGE) was made. The protein bands of 44 and 83 kDa were determined as major band in E.faecalis OG1RF and E.faecalis OG1X(pAM9058). On the other hand; E.faecalis OG1X(pAM944) showed a 43 kDa major band. For the antigenic characterization, the immunblot analysis was performed. All of the three strains of E.faecalis showed common antigenic protein bands which were 165, 35 ve 32 kDa. The other antigenic protein bands of E.faecalis OG1X(pAM944), E.faecalis OG1RF and E.faecalis OG1X(pAM9058) were determined as 85, 65, 55, 39, 29 kDa; 83, 75, 45 kDa; 111, 98, 83, 75, 55, 45, 29 kDa; respectively. In this research, the Glycan Detection Kit and PAS staining were used for investigation of glycoproteins. In PAS staining, no glycoprotein band was shown. In the Glycan Detection Kit, E.faecalis OG1RF and E.faecalis OG1X (pAM9058) showed a glycoproteins which were 111 and 39 kDa. E.faecalis OG1X(pAM944) showed glycoproteins which were 111, 106 and 39 kDa. In conclusion; no difference was determined for the protein profiles among the tested strains of Enterococcus faecalis. The antigenic profiles of the glycoproteins and the other proteins of E.faecalis was found as varied among these strains. It was the first study that suggested E.faecalis strains include the glycoproteins.