Memeli hücre kültüründe ATP uygulaması ile oluşan kuantal kalsiyum salınımında SERCA'nın rolü
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Ankara Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, BİYOFİZİK ANABİLİM DALI, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2004
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: FİGEN AMBER
Danışman: MEHMET UĞUR
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Memeli Hücre Kültüründe ATP Uygulaması ile Oluşan Kuantal Kalsiyum Salınımında SERCA'nın Rolünün Araştırılması Dinlenim durumunda sitoplazmadaki Ca2' konsantrasyonunu (|Ca"'],). hücre membranımda ve endoplasmik retikulumda (ER) bulunan Ca2+ pompaları düşük seviyelerde tutar. Ancak, agonist uyarımı ile açılan inositol 1,4,5-trilbsfat (IPî) kapılı Ca2" kanallarından sitoplazmaya salınan Ca"" kendi salınımını indükler (Calcium-induced calcium release) ve sitoplazmadaki [Ca2t]'nun birkaç misli artmasına neden olur. Bu artış, agonist uyarımı devam ederken dahi bir müddet sonra durur ve sitoplazmadaki Ca' konsantrasyonu dinlenim durumuna yakın bir değere döner. "Kuantal" ya da '"kademeli" kalsiyum salınımı olarak adlandırılan bu olguyu açıklamak için çeşitli hipotezler öne sürülmüştür. Bu çalışmamızın amacı agonist uyarımı sonucunda oluşan "kuantal" ya da "kademeli" kalsiyum salınımının oluşmasında ve Ca2*'un sitoplazmadan uzaklaştırılmasında Ca ATPazların rolünü incelemektir. LTK-8 ve RAT 1 kültür hücreleri, Fura-2 asetoksimetil ester (fura-2 AM) ile yüklenip [Ca2*]ı,'nu bir mikrospektroflorimetre ve bir CCD1 kamera ile ölçüldü. Deneyler sırasında agonist (ATP ve Fenilefrin) uyarıları ile oluşan Ca"" yanıtları F340/38O sinyal oranı olarak bilgisayara aktarıldı. LTK-8 hücrelerinde. ATP uyarısı ile kuantal kalsiyum salınımı gerçekleştirdiğini gördük Bu hücrelerde, submaksimal doz agonist yanıtının ardından verilen SERCA blokörü CPA, ani ve geçici bir Ca" yanıtı oluşturdu. CPA ve La'* kullanılarak SERCA ve PMCA ayrı ayrı bloke edildiği zaman hem RAT-1 hem de LTK-8 hücrelerinde Ca ~ yanıtlarındaki azalmanın hızına belirgin bir etki gözlemedik. Ancak iki blokörün birlikte verilmesi belirgin bir etki yaratabildi. Yaptığımız gözlemler hem SERCA'nın hem de PMCA'nın Ca+ salınınım dereceli özellik göstermesinde rolleri olduğunu ve dereceli şahmında Ca çıkışının azalmasında daha çok bunun rolü olduğunu ve bu iki Ca~+ pompasının ortaklaşa bir ilişki içinde çalıştıklarını düşündürmektedir. Elde ettiğimiz bir önemli bulgu da La un IP3 kenetli Ca4" yanıtlarını bloke etmesidir. Bu beklenmedik etkinin nedenlerinin araştırılması için daha kapsamlı çalışmalara ihtiyaç vardır.Anahtar Sözcükler: Kuantal kalsiyum salınımı. İP,, SERCA. PMCA