İnsan immünoglobülin G'sine karşı monoklonal antikor elde edilmesi
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Ankara Üniversitesi, Biyoteknoloji Enstitüsü, Biyoteknoloji Anabilim Dalı, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2005
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: ASLI ÜNSAL
Danışman: ÖZLEM UĞUR
Özet:İNSAN IMMUNOGLOBULIN G'SİNE KARŞI MONOKLONAL ANTİKOR ELDE EDİLMESİ ÖZET 1975 yılında Georges J.F. Köhler ve Cesar Müstein tarafindan geliştirilen hibridoma teknolojisi ile hücre soylarının oluşturulması, antikorların sentezlenmesini de mümkün kılmıştır. Tek bir çeşit antikor sentezleyen fakat yaşam süreleri sınırlı olan B lenfositleri ile ölümsüz miyelom hücrelerinin birleştirilmesi bu teknoloji sayesinde gerçekleşmiştir. Gerçekleşen bu füzyonun ardından hücreler seçici besi yerine alınmış, sadece iki özelliği birden taşıyan hücrelerin, hibridomalann, bu ortamda yaşamaları mümkün olmuştur. Sonuç olarak ölümsüzlük özelliğine sahip, aynı antikordan sınırsız miktarda üreten B lenfositleri üretilmiştir. Hücre kültürlerinde gelişen bu hücreler sadece tek bir antijenik yapıyı tanıdıklarından seçicilikleri yüksektir. Bu özelliklerinden dolayı monoklonal antikorların kullanım alanları çok geniştir. Bu antikorlar tedavi, tam ve araştırma amaçlı olarak kullanılmaktadır. Bu çalışmada BALB-c fareleri çeşitli zaman aralıklarında insan İgG'si ile aşılanmış, yeterli antikor seviyesine ulaşıldığında fare dalağı çıkarılarak parçalanmış, miyelom hücreleri ile birleştirilmiş ve hibrit hücreler HAT içeren besi yerinde seçilerek çoğaltılmıştır. Hibridomalann ürettiği antikor miktarı ELISA yöntemiyle saptanmıştır. Yüksek pozitiflik veren klonlar alt klonlama işlemine tabi tutulduktan sonra bu hücreler arasından ELISA kontrollerinde uygun nitelikte antikor salgıladığı belirlenen klonlar serum içermeyen ortamda çoğaltılmış ve hücre üst sıvıları toplanmıştır. Hücre üst sıvılarının içerdiği antikor Protein G kolondan geçirilerek saflaştınlmış ve elde edilen preparatın saflığı poliakrilamid jel elektroforezi ile kontrol edilmiştir. Primer antikor olarak hücre üst sıvılarının kullanıldığı Western blot analizleri ile, elde edilen antikorların insan İgG, İgA ve İgM izoformlan ile verdikleri reaksiyonlar değerlendirilmiştir. Sonuç olarak insan İgG'sine karşı monoklonal antikor üreten 13 klon elde edilmiştir. Bu klonlann ürettikleri antikorların İgM ve İgA ile de reaksiyon verdikleri saptanmıştır. Anahtar kelimeler: Hibridoma, Hücre jüzyonu, Monoklonal antikor, İgG