ΔNP63β geninin T98G hücreleri üzerindeki fenotipik ve genotipik özelliklerinin araştırılması

---

Tezin Türü: Doktora

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Ankara Üniversitesi, Biyoteknoloji Enstitüsü, Biyoteknoloji Anabilim Dalı, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2015

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: BUSE TÜREGÜN ATASOY

Danışman: FİKRET ŞAHİN

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

P53 ailesi üyelerinden biri olan p63 yapısal olarak p53 ile benzer olsa da fonksiyonel olarak, oluşturduğu izoformlarıyla p53'den farklılıklar göstermektedir. Bu tezde, p53 ailesinin bir üyesi olarak bilinen, p63 proteinin izoformlarından biri olan, fonksiyonu tam olarak bilinmeyen ve henüz kayda geçmiş ayrıntılı literatür çalışması olmayan ΔNp63β'nın insan glioma kanser hücresi, T98G hücreleri üzerindeki fenotipik ve genotipik özellikleri incelendi. P63 proteinin tümör baskılayıcı olarak hücrede rol aldığı bilinmektedir. Bu nedenle ΔNp63β proteinin, T98G hücresinin fenotipi ve genotipinde oluşturacağı etkileri sürekli hücrelerde izleyebilmek için doksasiklin varlığında indüklenen pRetroX-Tet-On vektör sistemi kullanıldı. İlk olarak rtTA ifade eden bu vektör sistemi ile sürekli hücre hatları elde edildi ve bu hücre hattına ΔNp63β ifade eden pRetro-pur vektör sistemi transfekte edildi. ΔNp63β ifade eden bu hücre hattı kullanılarak bu proteinin hücre üzerindeki fenotipik ve genotipik etkileri incelendi. Literatür bilgilerine göre, p63 proteinlerinin, TA izoformları tümör baskılayıcı, ΔN izoformlarının onkojen olarak kabul edilmelerine karşın , ΔN izoformlarından biri olan ΔNp63β'nın T98G hücresindeki ifade artışı dramatik bir şekilde hücre ölümüne neden olmuştur. Gerçekleşen bu hücre ölümlerinin nedeni beklenildiği gibi apoptozisden değil ΔNp63β proteininin hücre sitotoksik etkisinden kaynaklandığı saptandı. ΔNp63β proteinin genetik etkilerini araştırmak amacıyla temel olarak p53 proteinin hedef genleri ve proteinlerinin ifade analizleri yapıldı. ΔNp63β'ın apoptozis ile ilgili genlerin ifadelerinde değişiklik oluşturmadığı buna karşın anti apoptotik genlerde artışa neden olduğu belirlendi. Ayrıca P53 ile ilgisi kanıtlanmış interferon (IFN) ve IFN tarafından regüle edilen genler olarak adlandırılan ve hücre defansında rol alan hedef genlerde p53'ün oluşturduğu genetik değişikliklere benzer değişiklikler ΔNp63β ifadesi artmış hücrelerde de belirlendi. Onkojenitede rol alan birçok gen ifadesi düzeyinde artış görünmesine rağmen ΔNp63β ifadesinin artığı T98G hücrelerinde gerçekleşen hücre ölümlerinin nedenlerinin ortaya konması için daha fazla araştırmaya gereksinim vardır.