Koyun ve farelerde kist hidatik proteinlerinin karşılaştırmalı analizi ve antijenik proteinlerde glikoprotein varlığının değerlendirilmesi


Tezin Türü: Doktora

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Ankara Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2007

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: SERAP ÜNÜBOL AYPAK

Danışman: HAMDİ UYSAL

Özet:

Hidatik kist hastalıgı, Echinococcus cinsine baglı türler tarafından olusturulan, insan ve hayvan saglıgına verdigi önemli zararların yanı sıra sebep oldugu ekonomik kayıplar nedeniyle de güncelligini ve önemini koruyan paraziter bir zoonotik hastalıktır. Bu çalısmada koyun ve farelerde kist hidatik proteinlerinin, antijenik proteinler ve antijenik glikoproteinler yönünden karsılastırılması amaçlanmıstır. Bu amaçla 20'ser adet enfekte ve 10'ar adet saglıklı koyun ve fare kullanıldı. Hidatidosisli koyunlardan ve deneysel enfekte farelerden elde edilen kist sıvısı, kist membranı ve protoskolekslere ait proteinler SDS-PAGE yöntemi ile ayırt edildi. Ayırt edilen proteinlerden hangilerinin hastalıga spesifik antijenler içerdigi (hastalık pozitif serumlar kullanılarak) immunblotting teknigi ile belirlendi. Koyun kist sıvısı, membran ve protoskolekslerde 116 kDa ile 26 kDa arasında, fare kist sıvısı ve membranlarında 106 ile 30 kDa arasında degisik sayılarda antijenik bantlar tespit edildi. Koyun kist sıvısı ile fare kist sıvısı arasındaki ortak antijenik bantların 40 ve 26 kDa, koyun kist mebranı ile fare kist mebranı arasındaki ortak antijenik bantların 48 ve 40 kDa oldugu belirlendi. Belirlenen antijenik proteinlerden, glikoprotein yapı-sında olanlar ve bunların hangi sekerleri bulundurdukları ``Dig-Glycan Detection ve Dig-Glycan Differentiation kitleri'' ile belirlenmistir. Koyunlarda her üç kist materyalinde de (kist sıvısı, kist membranı, protoskoleks) 116, 68, 48 kDa'luk proteinlerin, farelerde her iki kist materyalinde de (kist sıvısı, kist membranı) 106, 48 ve 40 kDa'luk proteinlerin ortak glikoproteinler oldugu tespit edilmistir. Bu glikoproteinlerin mannoz, galaktoz, Nasetil galaktozamin, sialik asit gibi sekerlerden bir yada bir kaçını içerdikleri belirlenmistir. Koyun ve farelerin kist sıvısı ve kist membranı açısından yapılan genel karsılastırmasında ortak bantların, molekül büyüklügü, glikoprotein varlıgı ve seker yapıları yönünden benzerlikler ve farklılıklar gösterdigi görülmüstür.AbstractHydatid cyst disease (Hydatidosis) is a parasitic disease which is formed by Echinococcus genus belonging species and it is important and gives serious harms on human and animal health as well as its economic losses. The aim of this study is to compare the hydatid cyst proteins of mice and sheep in terms of antigenic proteins and antigenic glycoproteins. For this reason 20 each infected sheep and mice and 10 each healthy sheep and mice were used. Cyst fluid, cyst membrane and proteins from protoscolex which were derived from hydatidosis infected sheeps and experimentaly infected mice were separated by SDS-PAGE. Antigenic proteins were determined by immunblotting technique. Moleculer weights of antigenic proteins from cyst fluid, cyst membrane and protoscolex of sheep were determined in size between 116 kDa and 26 kDa by SDSPAGE. In mice cyst fluid and cyst membrane, molecular weights of antigenic proteins were found between 106 kDa and 30kDa. Common antigenic bands of hydatid fluid from sheep and mice were found to be 40 and 26 kDa. Common antigenic bands of hydatid membrane from sheep and mice found to be 48 and 40 kDa. Sugars of antigenic proteins in glycoprotein structure were determined by Dig-Glycan detection and Dig-Glycan differentiation kits. Glycan Analysis of samples showed that 116, 68 and 48 kDa proteins in each three cyst material (cyst fluid, cyst membrane and protoscolex) obtained from sheep were found to be common glycoproteins. In addition to this, 106 , 48 and 40 kDa proteins in each two cyst material (cyst fluid, cyst membrane) obtained from mice were also found to be common glycoproteins. It was determined that these glycoproteins include one or more sugar structures such as mannose, galactose, N-acetyl galactosamine and sialic acid. In the context of sheep and mice cyst fluid and cyst membrane comparison, it was determined that common proteins shows similarities and dissimilarities in molecular weight, glycoprotein and sugar structures in general.