Tezin Türü: Tıpta Uzmanlık
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Ankara Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Dahili Tıp Bilimleri Bölümü, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2023
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: SEFA METİN
Danışman: Hakan Gürdal
Özet:
DUSP1
PROTEİNİNİN MEME KANSERİ ÜZERİNDEKİ ETKİLERİNİN ARAŞTIRILMASI
Mitogen-activated protein kinase (MAPK)
ailesi hedef proteinlerinin serin ve treonin aminoasitlerini fosforile eden bir
protein kinaz ailesidir. Bu protein kinazlar ERK, JNK, p38 olmak üzere üç temel
alt aile şeklinde sınıflandırılabilir. MAPK ailesi hücre büyümesi, hücre
proliferasyonu, mitoz, apoptozis gibi birçok hayati hücresel fonksiyonun
düzenlenmesinde görev alır. Dual-specificity phosphatase (DUSP) ailesi
MAPK’leri defosforile eden protein fosfataz ailesidir. Hedef proteinlerinin hem
tirozin hem de serin/treonin rezidülerini defosforile edebilme yeteneklerinden
dolayı bu proteinlere Çift Spesifik fosfataz ismi verilmiştir. Dual-specificity
phosphatase 1 (DUSP1) MAPK aktivasyonunu düzenleyerek inflamasyon, apoptozis,
hücre büyümesi, hücre proliferasyonu gibi birçok hücresel fonksiyonda rol alır.
Çalışmamızda üçlü negatif meme kanseri olan MDA-MB-231
hücreleri kullanılmıştır. CRISPR/Cas9 yöntemi ile bu hücrelerde DUSP1 proteini
ifadesi azaltılmıştır. Bu hücrelerde proliferasyon ve motilite deneyleri
yapılmış, Western Blot yöntemi ile MAPK proteinlerinin ifadelerinde değişmeler
değerlendirilmiştir. Proliferasyon deneyleri Incucyte live-cell analysis’ sistemi ile yapılmıştır. Elde edilen
proliferasyon eğrileri üzerinden hücrelerin ikiye katlanma zamanları ve
maksimum hücre sayıları hesaplanmıştır. Hücre motilitesi ‘Transwell migration
assay’ ve yara iyileşmesi deneyleri ile ölçülmüştür.
Proliferasyon
deneylerinde DUSP1 ifadesinin azalmasının hücrelerin
proliferasyonunu azalttığı görülmüştür. Ek olarak DUSP1 inhibitörü olan BCI,
MDA-MB231 hücrelerinde antiproliferatif etki göstermiştir. Bu antiproliferatif
etki kontrol hücrelerinde daha fazladır. Bu durumun nedeninin, DUSP1-CRISPR
hücrelerinde DUSP1 proteininin azalmasından kaynaklandığı ve azalmış DUSP1
ifadesi nedeniyle BCI’nın bu grupta daha az etkin olduğu düşünülmüştür. Ayrıca
DUSP1 ifadesinin azalması bu hücrelerde sisplatinin antiproliferatif etkisinin
artmasına neden olmuştur. Aynı sisplatin dozunda DUSP1-CRISPR hücrelerinin
ikiye katlanma zamanları kontrol hücrelerine göre daha fazla artmıştır.
Yukarıdaki sonuçlara benzer şekilde DUSP1 inhibitörü olan BCI’nın kontrol
hücrelerinde sisplatinin antiproliferatif etkisini DUSP1- CRİSPR grubuna göre
daha fazla artırdığı görülmüştür. Bu sonuç da benzer şekilde bize, DUSP1-CRISPR
hücrelerinde BCI’nın daha az etkili olmasının DUSP1 proteininin azalmasından
kaynaklandığını düşündürmüştür.