Akademik Veri Yönetim Sistemi
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Ankara Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2012
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: MARYA VAKIL NASLIYAN
Danışman: ÖZLEM YILDIRIM
Özet:Çalışmamızda aldoz redüktaz (EC 1.1.1.21) enzimi sığır karaciğer ve böbrek dokularından izole edilmiştir. İzole edilen aldoz redüktaz daha sonra gluteraldehid kullanılarak kimyasal çapraz bağlama yöntemi ile fotoğrafik jelâtin içine immobilize edilmiştir. Hazırlanan film striplerinin enzim sızıntısı kontrolleri fosfat tamponu ( 0.067 M, pH 6.2) ile yıkanarak yapılmıştır. Bağlanmamış enzim miktarı yıkama çözeltisindeki enzim aktivitesinin spektrofotometrik yöntemle tayin edilmesiyle bulunmuştur. Enzim konsantrasyonunun enzimatik aktivite üzerindeki etkileri çalışılmıştır. Serbest ve immobilize edilmiş aldoz redüktaz enzimi için pH, sıcaklık ve depolama şartları optimize edilmiştir. Tekrar kullanım ve depolama kararlılığının immobilize enzim aktivitesi üzerine etkileri saptanmıştır. Karaciğer ve böbrekten elde edilen serbest enzim ve çapraz bağlanma yöntemi ile immobilize edilen enzim için optimum pH değerleri sırasıyla karaciğer için 7,0; 7,5 ve böbrek için 7,0; 7,5 olarak bulunmuştur. Serbest enzim, çapraz bağlanma yöntemleriyle immobilize edilen enzimler için optimum sıcaklık değerleri sırasıyla karaciğer için 60 ºC ve 50 ºC böbrek için 60 ºC ve 50–60 ºC olarak bulundu. Immobilize aldoz redüktaz enzimi 15 tekrar kullanım sonunda aktivitesinin karaciğer aldoz redüktazı için % 65’ini ve böbrek aldoz redüktazı için % 56’sını koruduğu tespit edilmiştir. Her iki dokudan immobilize aldoz redüktaz enzimi 4°C’de 20 gün süresince aktivitesini % 95 oranında korurken serbest enzimi aynı sürede aktivitesini ortalama % 85 oranında korumuştur.Abstract In our study, aldose reductase (EC 1.1.1.21) was isolated from bovine liver and kidney tissues. İsolated aldose reductase then was immobilized into photographic gelatin by chemical cross linking with gluteraldehyde. Leakage from immobilized film strips were controlled by washing with phosphate buffer (0.067 M, pH 6.2) and the activities of the enzyme were measured spectrophotometrically to determine the amount of unbounded enzyme. The effect of enzyme concentrations on immobilized enzyme activity was studied with washed film strips. The optimum conditions for pH, temperature and storage conditions of free and immobilized aldose reductase were determined. The effect of storage stability and continuous use on the activity of immobilized film strips were also investigated. Optimum pH was found as 7,0; 7,5 and 7,0; 7,5 and optimum temprature was determined as 60ºC, 50 ºC and 60ºC, 50–60ºC for free aldose reductase and crosslinking bonded enzymes from bovine liver and kidney respectively. The immobilized aldose reductase were determined to maintained 65% and 56% of its original activity after 15 reuses from liver and kidney aldose reductase respectively. It was found that the immobilized aldose reductase stored at 4°C retained 95% of its original activity after 20 days, whereas the mean free aldose reductase stored at 4°C retained 85% of its activity after the same period from both tissues respectively.