İmmunojen ASCT2 sekansının rekombinant protein üretimi ve poliklonal ASCT2 üretimi
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Ankara Üniversitesi, Biyoteknoloji Enstitüsü, Biyoteknoloji Anabilim Dalı, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2014
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: GAMZE ÇAĞATAY
Danışman: ERKAN YILMAZ
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Biyoteknoloji alanında ve terapötik çalışmalarda son on beş yıldır, antikor üretim teknolojisi devrimsel gelişmelerin en önemlilerinden biri haline gelmiştir. Bu teknolojinin oluturulması için öncelikle saf, spesifik ve güvenli antijenlerin oluşturulması gerekmektedir. Rekombinant DNA teknolojisi istenilen özelliklere sahip antijenin üretilmesi için kullanılan en temel yöntemlerden bir tanesidir. Bu çalışmada glutaminin hücre içine alınmasında görevli amino asit taşıyıcı 2 proteini (ASCT2)'nin immunojenik molekülünün rekombinant DNA teknolojisi ile üretimi ve poliklonal ASCT2 antikor üretimi gerçekleştirilmiştir. Balb/C dişi farenin karın içinde oluşan 'ascites' ismi verilen sıvı toplanmış ve hedef antijene spesifik antikor üretildiğini göstermek için yapılan ascites sıvısı ve kuyruk veninden alınan serum örnekleri western blot deneylerinde primer antikor olarak kullanılmıştır. Ascites sıvısı ve serumun içindeki antikorların istenilen antijene bağlandığı tespit edilmiştir. Bir sonraki adımda fazla miktarda ascites örneğinin toplanıp antikor saflaştırma koşulları optimize edilecektir. Saflaştırılmış ASCT2 poliklanal antikorun yeterli donanıma sahip şirketlerde ELISA kiti oluşturulmasında kullanılmasını hedeflemenmektedir.Çalışmanın ikinci kısmında ise ASCT2 proteininin ifadelenmesinin karaciğer kanser hücre hattı (HepG2) ve obez/normal farelerden alınmış karaciğer ve yağ doku gruplarında regülasyonuaraştırılmıştır.HepG2 hücre hattında glutamin konsantrasyonu artırıldığında ASCT2 ifadelenmesinin arttığı gözlenmiştir. Obez farelerin karaciğer ve yağ dokularında ise normal faredekilere göre daha fazla ifadelenme olduğu saptanmıştır. Sonuç olarak, poliklonal antikor üretim teknolojisi başarılı bir şekilde uygulanmıştır ve laboratuvarda üretmiş olduğumuz poliklonal antikorları kullanarak ASCT2'nin obez farelerin karaciğer ve yağ dokularında daha fazla ifade edildiği gözlenmiştir.