İzole hücrelerin taramalı elektron mikroskobunda incelenmesi için hazırlama yöntemlerinin geliştirilmesi
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Ankara Üniversitesi, Biyoteknoloji Enstitüsü, Biyoteknoloji Anabilim Dalı, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2004
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: BURCU EMİNE TEFON
Danışman: ALP CAN
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:İzole Hücrelerin Taramalı Elektron Mikroskobunda İncelenmesi İçin Hazırlama Yöntemlerinin Geliştirilmesi ÖZET Bu çalışmada izole hücrelerin taramalı elektron mikroskobunda incelenebilmesi için hazırlama yöntemlerinin geliştirilmesi amaçlandı. İzole hücreler olarak kan hücreleri kültür hücreleri, ovositler ve spermatozoonlar kullanıldı. Bu hücreler Trump's çözeltisi, Karaowsky çözeltisi ve gluteraldehit+sodyum fosfat tamponu ile değişen zaman uzunluklarında fiske edildi. Ardından hücreler osmiyum tetraoksit+fosfat tamponunda değişen sürelerde ikinci kez fiske edildi. Postfikse edilen hücreler aseton ya da etanol kullanılarak dehidrate edildi. Hücreler, kritik nokta kurutucusunda (CPD) ya da havada kurutma yöntemiyle kurutuldu. Kurutulan hücreler değişik kalınlıklarda altm-paladyum (Au-Pd) ile kaplandı ve SEM'de sekonder elektron dedektörü kullanılarak incelendi. Uygulanan bu kimyasal ve mekanik işlemler sırasında hücrelerin yüzey yapılarının ne kadar korunduğu ve hücre kaybının olup olmadığı araştırıldı. Sonuç olarak Trump's fiksatifinin bütün hücreler için uygun fiksatif olduğuna karar verildi. Fiksasyon süreleri hücrelere göre 30dk ile 24 saat aralığında değişik uzunluklarda tutuldu. Kültür hücreleri ve ovositler postfikse edildiğinde daha iyi sonuç alınırken kan hücrelerinde ve spermatozoonlarda postfiksasyona gerek duyulmadı. Tek hücrelerin hepsinin, kurutma aşamasını kolaylaştıran ve yüzey gerilimini en aza indiren etanolun artan derişimlerinde 10-1 5dk arasında dehidrate edilmesine karar verildi. Kan hücreleri dışında bütün hücreler CPD'de üç kez yıkanarak kurutuldu. Daha sonra hücreler yüzey yapılarına ve büyüklüklerine göre 10-15nm kalınlığında Au-Pd ile kaplandılar. Yukardaki işlemlerin uygulanması halinde yapılan çalışmalarda yüzeye tutunma probleminin ortadan kalktığı, hücre kaybının olmadığı ve yüzey yapılarının iyi korunduğu görüldü. Anahtar Sözcükler: kan hücreleri, kültür hücreleri, ovosit, preparasyon, spermatozoon, taramalı elektron mikroskobu