Türkiye kaynaklı peynir örneklerinden izole edilen Enterococcus cinsi üyelerinin biyofilm oluşturma özelliklerinin araştırılması

---

Tezin Türü: Doktora

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Ankara Üniversitesi, Biyoteknoloji Enstitüsü, Biyoteknoloji Anabilim Dalı, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2016

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: MARYAM DIANI

Danışman: NEFİSE AKÇELİK

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

Çalışmamızda ilk olarak peynir izolatı olan 15 adet Enterococcus faecalis ve 33 adet Enterococcus faecium izolatları ile, Enterococcus faecalis ATCC29212 ve Enterococcus faecalis OG1RF kontrol suşularının biyofilm oluşum özellikleri incelenmiştir. E. faecalis izolatların %26.6' si biyofilm üreticisi iken geri kalan izolatların biyofilm üretim özelliğine sahip olmadığı belirlenmiştir. Bunun yanında, E. faecium izolatlarının %33'sının biyofilm üreticisi olduğu belirlenmiştir. 48 Enterokok izolatının MIC değerleri incelendiğinde kanamisin antibiyotiğine karşı 48 izolatın tamamı dirençli bulunurken, izolatların %83.3' ü vankomisin antibiyotiğine karşı direnç profili sergilemiştir. Ayrıca biyofilm üreticisi olan izolatların tamamı planktonik formdayken gentamisine karşı duyarlı olmalarına karşın biyofilm ürettikleri durumlarda gentamisine yüksek düzeyde (32000 mg/L) dirençli hale geçmişlerdir. Benzer şekilde, izolatlar biyofilm oluşturduklarında vankomisin antibiyotiğine dirençlerinin 16000 mg/L'ye kadar yükselmiştir. Hidrofobisite sonuçlarına göre izolatların biyofilm oluşturma düzeyleri ve hidrofobisite yeteneği arasında anlamlı bir ilişkiye rastlanmamıştır. İzolatların jelatinaz üretim denemesi sonucuna göre E. faecalis izolatları içerisinde dört (64, 72, 78, 140 kodlu izolatlar) güçlü proteaz (+++), ve üç (ATCC 29212, 79, 81 kodlu suşlar) negatif proteaz (-) ve kalan dokuz suş zayıf proteaz (+) özelliğinde suş saptanmıştır. E. faecium izolatlarında ise bir suş (14 kodlu izolat) proteaz negatif bulunurken, diğer 32 izolatın tamamının zayıf proteaz (+) olduğu belirlenmiştir. İzolatların değişik glukoz konsantasyonda biyofilm üretimleri incelendiğinde; %0.1 ve %1.5'lik glukoz içeren TSB besi ortamında %0.5'lik glukoz içeren TSB besi ortamına göre daha yüksek miktar biyofilm ürettikleri görülmüştür. Morfotiplendirme denemesinde Enterokok izolatları tarafından üretilen biyofilmlerin tamamının aynı morfotipte olduğu bulunmuştur. esp geni araştırılması sonucunda 48 suş arasında toplam 4 suş esp genini sahip olduğu belirlenmiştir. esp geni bakımından pozitif bulunan iki E. faecalis izolatı (81 ve 119 kodlu izolatlar) ve iki E. faecium (60 ve 134 kodlu izolatlar) izolatları arasında biyofilm üreticisi olmadığı ve biyofilm üreticisi E. faecalis ve E. faecium izolatları arasında hiçbirinin esp genini içermediği tespit edilmiştir. Enterokokların yüzey proteini kodlayan esp geninin biyofilm üreticisi olmayan S. Typhimurium LT2'suşuna aktarımı sonucunda, bu genin S. Typhimurium LT2 suşunda ifade edildiği qRT-PCR denemesi ile gösterilmiştir. Ayrıca bu bulgu, esp geninin Gram pozitif bakteri proteini olmasına rağmen Gram negatif bir bakteride ifade olması ve daha önce biyofilm üreticisi değilken, orta düzeyde biyofilm üreticisine dönüşmesi bakından da önem taşımaktadır.