Hepatit delta virus RNA'sının PCR ile belirlenmesi ve kronik delta hepatitli Türk hastalarda HDV RNA genotiplendirilmesi
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Ankara Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, TEMEL HEPATOLOJİ ANABİLİM DALI, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2000
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: TİJEN ŞENGEZER
Danışman: ABDURRAHMAN MİTHAT BOZDAYI
Özet:ÖZET Kronik Hepatit Delta Viruslü Hastalarda Hepatit Delta Virus RNA'sının (HDV RNA) ln-house PCR (Polimeraz zincir reaksiyonu) ile Belirlenmesi ve Türk Hastalarda HDV RNA genotiplendirilmesi Hepatit Delta Virüsü (HDV) enfeksiyonu tanısında kullanılan serolojik testlerden Anti-HDV'nin, yeni ve geçirilmiş enfeksiyonu ayırmada yetersiz, HDAg'nın ise kısa süreli ve düşük titrede görülmesi, tanı ve tedaviye yanıtı izlemede HDV-RNA'nın moleküler yöntemlerle gösterilmesini önemli kılmaktadır. HDV'nin Genotip 1,11 ve III olarak tanımlanan 3 genotipi vardır. Çalışmanın amacı Hepatit Delta Virus RNA'sının RT-PCR ile belirlenmesi ve kronik delta hepatitli Türk hastalarda HDV genotipinin saptanmasıdır. Çalışmaya Anti-Delta'sı pozitif 67 hasta alındı (12K/55E). HDV-RNA, serum örneklerinden acid-guanidinium-phenol-chloroform yöntemi ile ekstrakte edildi. Hekzanükleotid ve AMV ters transkriptaz enzimi kullanılarak komplementer DNA sentezlendi. Türkiye'deki hastalarda HDV-RNA genotipi ve dizi özellikleri bilinmediğinden daha önce yayınlanmış 2'si iki turlu ve biri tek turlu olmak üzere 3 primer seti ile PCR yapıldı. Genotiplendirme, RFLP yöntemiyle, PRC ürünlerinin Smal enzimi (5"CCC/GGG 3') kullanılarak kesimi sonucu gerçekleştirildi. Viral genomun delta antijenini kodlayan bölgesine özgü, 5413-8276 ve 5414-5415 primerlerinden oluşan ve 405 bp büyüklüğünde PCR ürünü veren 3. Setin amplifikasyon etkinliği en yüksek bulundu. Bu setle çalışan 67 hastanın 59'unda HDV-RNA PCR pozitif bulundu (%88). HDV-RNA pozitif hastalara ait PCR ürünlerinin Smal enzimi ile kesimi sonucunda, hastaların tümünde 227+178 bp uzunluğunda iki banttan oluşan ve Genotip l'e karşılık gelen patern saptandı (%100). Ayrıca 22 hastada Smal enzim kesim noktalarını içine alan bölgenin DNA dizi analizi yapılarak Genotip I olduğu doğrulandı. 40PCR,HDV-RNA gösterilmesinde özgül ve duyarlı bir moleküller tanı yöntemidir. Ülkemizdeki HDV enfeksiyonlarının PCR ile tanısında 5413-8276 ve 5414-5415 primerleri viral genoma özgül gözükmektedir. Çalışmanın sonucu, Türkiye'de hakim olan HDV genotipinin Genotip I olduğunu ortaya koymaktadır. Anahtar sözcükler: Genotip, HDV, Hepatit, PCR, RFLP 41