Starter Potansiyeli Olan Streptococcus thermophilus ve Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus Izolatlarında, Bazı Metabolit Transkript Seviyelerinin (mRNA) Es Zamanlı PCR (qPCR) Metodu Kullanılarak Belirlenmesi ve HPLC Analiz Sonuçları ile Dogrulanması.


Akyol İ.

TÜBİTAK Projesi, 1001 - Bilimsel ve Teknolojik Araştırma Projelerini Destekleme Programı, 2024 - 2027

  • Proje Türü: TÜBİTAK Projesi
  • Destek Programı: 1001 - Bilimsel ve Teknolojik Araştırma Projelerini Destekleme Programı
  • Başlama Tarihi: Mart 2024
  • Bitiş Tarihi: Mart 2027

Proje Özeti

Fermentasyon sonucu aroma oluşumu, fermentasyona uğrayan gıda maddesinin kimyasal bileşimine ve fermentasyonda rol alan mikroorganizmanın ilgili metabolit üretiminde rol alan enzimleri kodlayan genin transkripsiyon seviyesine bağlıdır. Nitekim gıdalarda fermentasyondan sorumlu farklı laktik asit bakteri (LAB) türleri ve bu türlere ait suşlar karbonhidrat metabolizmasını bakterinin genetik kapasitelerine göre değişen miktarlarda çeşitli metabolitlere dönüştürebilmektedir. İzolatların zaman içerisinde kazandıkları ve doğal mutasyonla oluşan genetik özellikleri metabolit dönüşümünde daha etkin metabolik aktiviteye sahip olmalarına neden olabilmektedirler.

Yoğurt, S. thermophilus ve L. delbrueckii subsp. bulgaricus starter bakteri türlerinin ortak olarak gerçekleştirdiği fermente süt üründür. Geleneksel yoğurt çok farklı genetik özelliklere sahip S. thermophilus ve L. bulgaricus suşları kullanılarak yapıldığı için aromatik profil olarak da farklı özellikler taşıyabilmektedir. Bu iki bakteri türü arasındaki simbiyotik ilişki fermentasyon özelliklerini önemli ölçüde belirlemektedir. Tamamlanan genom bilgilerinden bu bakterilerde simbiyotik yaşama da bağlı olarak sessiz gen varlığı oldukça fazla sayıdadır. Dolayısı ile potansiyel starterlerin tespit edilmesinde metabolit üretimlerinden sorumlu genlerin varlığından ziyade bu genlerin transkript seviyelerinin belirlenmesi ve metabolit üretimleri ile ilişkilendirilmesi daha isabetli seçimler yapılmasına imkan tanıyacaktır.

Bu projede ülkemizin yedi coğrafi bölgesinden toplanmış köy yoğurtlarından izole edilmiş 60 adet S. thermophilus ve 20 adet L. bulgaricus izolatları kullanılacaktır. Çalışmada kullanılacak bakterilerin moleküler konfirmasyonu yapılacaktır. Bakterilerden inkübasyon sürecinin 120 ve 270. dakikalarında örnekler alınarak RNA izolasyonları gerçekleştirilecektir. cDNA’ ya dönüştürülecek örneklerin eş zamanlı PCR (qRT-PCR) analizleri yapılacaktır. qRT-PCR sonuçlarına göre seçilen S. thermophilus ve L. bulgaricus izolatlarının metabolit (Pirüvat, D-laktat, L-laktat, format, asetaldehit, treonin, etanol, asetat, asetoin, diasetil, 2-3 bütandiol) üretim kapasiteleri HPLC (Yüksek Basınçlı Sıvı Kromotografisi) cihazında belirlenecektir. Eşzamanlı PCR ve HPLC sonuçları göz önüne alınarak seçilen S. thermophilus ve L. bulgaricus suşları RNA sekans analizine gönderilerek transkriptom analizleri yapılacaktır.

Bu proje toplamda 7 iş paketinden oluşmakta ve ekipte 2 farklı üniversiteden alanında yetkin 1 yürütücü, 1 danışman, 4 araştırmacı, 1 doktora sonrası araştırmacı, 2 doktora ve 1 yüksek lisans öğrencisi bulunmaktadır. Çalışma sonucunda geleneksel yoğurtlardan izole edilen S. thermophilus, L. bulgaricus suşlarının önemli aroma metabolitlerini kodlayan genlerin transkriptom analizleri ile belirlenmesi hedeflenmektedir. Endüstriyel olarak önemli olan aroma bileşenlerinin üretimi, bu bileşenleri sentezleyen enzimleri kodlayan genlerin suş bazında tespit edilmesi ile elde edilen yeni bilgiler literatüre katkı sağlayacak, aynı zamanda da yeni çalışmaların ve projelerin önünü açacaktır. Bu proje, potansiyel starter kültürlerin genetik kapasitelerinin transkript seviyesinde tespiti açısından değer taşımaktadır. Proje ile belirlenecek doğal izolatlar (S. thermophilus ve L. bulgaricus) metabolit üretimleri bakımından potansiyel starter kültür olarak gıda endüstrisine önerilebilecek nitelikte olabilecektir. Dolayısıyla bu çalışma ile yoğurt endüstrisine, genetik özellikleri ve aroma üretim kapasiteleri transkript seviyesinde belirlenmiş aroma geliştirici suşlar kazandırılacaktır ve üniversite sanayi iş birliği geliştirilecektir.